陈少白，原名闻韶，号夔石。1869年8月27日（清同治八年七月二十日）生于广东新会县。其父陈子桥是个乡绅，晚年加入基督教。四叔梦南亦为基督教徒，曾翻译西书供陈少白阅读，对他的影响较大。陈少白六岁起在家课读，1884年以后从族兄心夔、翰周及陈源泉等人读经书，学做八股文。1888年入广州格致书院学习。他擅长文学，能歌赋，会书画，有“才子”之称。但度量偏狭，出语尖刻，不易与人共事。

1889年在广州受洗入基督教。后因事赴港，经基督教会牧师区凤辉介绍，结识孙中山。翌年1月，由孙中山推荐入香港西医书院，二人从此成为挚友。后与孙中山、尤烈、杨鹤龄结为四兄弟，常在一起共商革命大计，被清廷通缉，时人称为“四大寇”。

1892年孙中山毕业离校，即辍学随孙中山，先后到香港、澳门、广州等地行医和开设药局。1893年春，孙中山把中西药局迁到广州西关，改名东西药局，并在香山（今中山市）石岐镇开设支店。陈少白经常来往广州、香港，负责店务同时从事革命活动。1894年，孙中山奔走革命无暇顾及医务，药局入不敷出，由陈少白负贵收拾处理股本，结束药局。

1894年11月，孙中山在檀香山建立革命团体兴中会。随即致书陈少白，要他在香港开展革命活动。翌年初，孙抵香港，陈少白及陆皓东、郑士良等人均入兴中会，誓言“驱除鞑虏，恢复中华，创立合众政府”。同时吸收辅仁文社的杨衢云、谢攒泰等人参加。在香港中环士丹顿街十三号成立了兴中会总部，对外称“乾亨行”以掩人耳目。他们经过商议，决定在广州发动武装起义，由孙中山赴广州担任军务，陈少白、陆皓东、郑士良、邓荫南等佐助，杨衢云驻香港负责后方接济及财政。孙、陈等在广州以农学会的名义设总机关，展开了各项筹备工作，联络广东各地的会党、绿林和防军，决定在10月26日（阴历九月初九）起义。结果因谋事不密，走漏了消息，致使这次起义未及发动即遭失败，陆皓东等人被捕牺牲。陈少白脱险，与孙中山、郑士良等东渡日本。

在日本横滨，孙、陈、郑结识侨商冯镜如等，成为同志；并建立起兴中会分会，以冯为分会长。不久孙、郑离日，陈少白在日本剪辫易服，取名服部次郎，助冯镜如编纂《英华字典》及办理兴中会分会事务。同时先后活动于横滨、东京等地，与日本志士曾根俊虎、宫崎寅藏等相识。

1897年秋孙中山复至日本，陈少白与孙中山、尢列、杨衢云等人常以横滨三余轩和修竹寄庐为游息议事之所，商议扩大革命力量。陈少白曾赴台湾活动，组织兴中会分会；但会员不多。翌年他再去台湾，筹得了一些捐款。戊戌政变后，康有为、梁启超逃至日本。日本志士热心促进以孙中山为首的革命党和康梁改良派的合作，陈少白代表革命党与康梁等人多次会谈。陈指出：“清政府已不可救药……今日局面，非革命，国家必无生机”，劝康等改弦易辙，共同实行革命大业。但因康有为坚持保皇立场而未果。

1899年奉孙中山之命到香港筹资创办《中国日报》，于1900年1月25日创刊，任报社首任社长和总编辑。并组织出版《中国旬报》。与此同时，为联络与积累革命力量，加人了粤三合会，被封为白扇(是三合会要职之一，属军师)，后加入哥老会，被推为龙头（山堂首领）。

1900年，《中国日报》成为策划起义的大本营。同年参加拟订《平治章程》和支持惠州起义。惠州起义失败，不少义士走避香港得到陈少白的安置。

1903年，《中国日报》并入李纪堂办的文裕堂印务公司，陈少白是公司的经理之一，仍负责报务。与此同时与程子仪、李纪堂等创办天演公司，开办彩南歌戏班，排演《文天祥殉国》、《六国朝宗》、《女儿英雄》等新戏，宣传民族民主革命思想。

1905年同盟会成立后不久，孙中山即派冯自由、李自重赴香港，与陈少白等共同商量组织香港同盟会分会。他们以兴中会为基础进行改组，吸收新同志参加，于秋冬间正式成立，会所设于《中国日报》社。众举陈少白为分会长，郑贯公为庶务，冯自由为书记。香港分会一向兼管西南各省党务军务以及联系海外交通等，分会长一职责任重大。这一时期，陈少白的革命活动相当广泛。他在反对美国取缔华工苛约的抵制美货运动中，任香港各界拒约会的顾问和谈判代表。他支持港商陈席儒、陈赓虞、杨西岩等人组织的粤路股东维护路权会，反对粤督岑春煊将粤汉铁路收归官办的决定，在《中国日报》上仗义执言。并常常亲自为该会撰写计划、文电，备受赞佩。

1906年8月，文裕堂印务公司破产，《中国日报》社改组，陈少白辞社长职，由新股东推冯自由为社长，陈仍负监督之责。陈同时辞同盟会分会长职，亦由冯继任。

陈少白此后热衷于经营企业。1908年他因维护粤汉路权获得酬金9000元，便以此款在九龙牛池湾购置田产十余亩建农场，并筑房屋移家居住。1910年他又任香港商工局顾问及四邑轮船公司司理。

1908年帮助广州西关的振天声剧团赴南洋演出爱国剧目，受到侨胞的欢迎。

1911年武昌起义，广东独立，任广东都督府外交司长，数月后辞职，组建等航公司，首议由华人自组公司，悬挂中国旗，先收回外国人租赁的西堤联兴大码头一座，成立粤航公司，被推举为总司理。公司购买法商公司哈德安、播宝两轮，航行于广州——香港。

民国8年（1919）粤航公司停办，陈少白把粤航公司的所有船只卖给英国，返还本息，并出资购下联兴码头，在码头旁（今沿江西路）建一楼宇，名日“塔影楼”，作为事务所，在广州时多居码头事务所中。

1921年5月，孙中山重返广州就任非常大总统，他受聘为总统府顾问，协助孙中山督师北伐。

1922年辞职回故里，热心家乡建设。在新会外海乡曾任民团保甲局长、乡事委员会主席、新会第四区区长兼外海乡乡长等职，热心整理乡政，兴修公路、筹办中小学等，闲暇撰文吟诗。

1930年被任命为国民党党史史料编纂委员会委员。晚年著有《兴中会革命史要》、《兴中会革命史别录》等。

1934年12月21日病逝于北平，国民政府下令为其举行国葬。